بیان القایی ژن گزارشگرGFP در رده سلولی LMH با استفاده از ناقلین لنتی ویروسی القا پذیر

Authors

  • عباس رحیمی شم آبادی دانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی- مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران
  • موسی گردانه پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، دپارتمان سلولهای بنیادی و پزشکی ترمیمی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران
Abstract:

هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (Tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) در سلول‏های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن EGFP تحت کنترل سیستم‏ Tet-ON قرار گرفت و بیان آن در سلول‌های کبدی جوجه رده LMH بررسی شد. ابتدا باکتری‏های مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل EGFP به‏همراه یک ناقل دوم که فعال کننده Tet (Tet-transactivator) به‏نام rtTA-M2 را حمل می‏کرد ترانسفورم شده و ذخیره ماکسی پرپ خالصی از هریک از این‏دو DNA پلاسمیدی فراهم شدند. سپس با روش رسوب DNA-فسفات کلسیم سلول‏های LMH با ذخیره هردو پلاسمید ترانسفکت شد. در مرحله بعد، غلظت‏های سریالی از آنالوگ Tet یعنی داکسی سیکلین را به محیط کشت سلول اضافه نمودیم به‏‏طوری‏که با افزایش غلظت DOX، بیان EGFP بیشتر القا گردید. نتایج: افزایش غلظت داکسی سایکلین افزایش بیان را به دنبال داشت. در 24 ساعت اول بعد از ترانسفکشن بیان به‏ترتیب برای غلظت‏های 0 ، 01/0 ، 1/0 و 1 میکروگرم بر میلی‏لیتر داکسی سایکلین 4/0، 2/6 ، 3/10و 16 درصد و در 24 ساعت دوم به‏ترتیب 4/6 ، 26 ، 3/28 و7/29بود.با این .جود، افزایش بیش از حد غلظت داکسی سایکلین باعث مرگ سلول‌ها گردید. نتیجه گیری:  تلفیق سیستم‏های القایی Tet با منشا باکتریایی و لنتی ویروس‏های نوترکیب مرتبط با انتقال ژن به سلول‏های انسانی می‏تواند باعث القا ژن در سلول‏های پرندگان شود. غلظت القا کننده بر میزان القا بیان ترانسژن تاثیر مستقیم می‏گذارد.  

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بیان القایی ژن گزارشگرgfp در رده سلولی lmh با استفاده از ناقلین لنتی ویروسی القا پذیر

هدف: با تلفیق سیستم االقایی تتراسیکلین (tet-inducible system) و ناقلین لنتی ویروسی، القا بیان ژن گزارشگر enhanced green fluorescent protein (egfp) در سلول‏های پرندگان مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش‏ها: ژن egfp تحت کنترل سیستم‏ tet-on قرار گرفت و بیان آن در سلول های کبدی جوجه رده lmh بررسی شد. ابتدا باکتری‏های مستعد با ناقل لنتی ویروسی القایی حامل egfp به‏همراه یک ناقل دوم که فعال کننده tet (t...

full text

بررسی بیان ژن گاما گلوبین با کاهش پایدار بیان ژن mbd2 توسط سیستم لنتی ویروسی در رده سلولی k562

پروتئین mbd2یکی از مهار کنند ه های ژن گاما گلوبین است.مکانیسم این مهار ناشناخته می باشد.با توجه به بیان ژن گاما گلوبین و پروتئین mbd2در رده سلولی k562،ما از این سلول ها به عنوان سیستم مدل استفاده کردیم.ابتدا پنج کلون لنتی ویروسی حاوی shrna-mbd2در سلول های 293tتست شدند،به این ترتیب که لنتی وکتور های plko.1به همراه shrna-mbd2به صورت گذرا به درون سلول های293tترانسفکت شدند و از اسکلت وکتور plko.1 ب...

15 صفحه اول

مدل‌سازی سرطان پستان متاستازی در موش BALB/c با استفاده از رده سلولی موشی و نشاندار نمودن پایدار رده سلولی با وکتور لنتی ویروسی

  مقدمه: متاستاز ، عامل اصلی مرگ­های با منشأ سرطان پستان است که علیرغم پیشرفت­های علمی اخیر، تغییرات ژنتیکی و مکانیسم­های مولکولی درگیر در متاستاز سرطان پستان هنوز به­طور کامل شناخته نشده­اند. مدل­های حیوانی مناسبی نیز برای بررسی مسیرهای سلولی و ژن­هایی که به­طور اختصاصی در جریان متاستاز سرطان نقش دارند، وجود ندارند. در مطالعه اخیر، مدل متاستازی سرطان پستان موشی با استفاده از رده سلولی 4T1 ایجا...

full text

مدل سازی سرطان پستان متاستازی در موش balb/c با استفاده از رده سلولی موشی و نشاندار نمودن پایدار رده سلولی با وکتور لنتی ویروسی

مقدمه: متاستاز ، عامل اصلی مرگ­های با منشأ سرطان پستان است که علیرغم پیشرفت­های علمی اخیر، تغییرات ژنتیکی و مکانیسم­های مولکولی درگیر در متاستاز سرطان پستان هنوز به­طور کامل شناخته نشده­اند. مدل­های حیوانی مناسبی نیز برای بررسی مسیرهای سلولی و ژن­هایی که به­طور اختصاصی در جریان متاستاز سرطان نقش دارند، وجود ندارند. در مطالعه اخیر، مدل متاستازی سرطان پستان موشی با استفاده از رده سلولی 4t1 ایجاد ...

full text

همسانه‌سازی و بیان ژن نوترکیب CD40Lانسانی در رده سلولی HEK293

چکیده سابقه و هدف CD40L ، پروتئینی غشایی و یکی از اعضای خانواده TNF است که نقش مهمی در انتقال پیام سلولی در ایمنی ذاتی و تطبیقی دارد. از آن جایی‌که این پروتئین نقش خود را از طریق تجمع گیرنده در سطح سلول هدف ایفا می‌کند، به ‌نظر می‌رسد فرم مالتی‌‌مری آن بتواند اثر قوی‌تری نسبت به فرم طبیعی ترایمری ایجاد کند. بر ‌این اساس در این مطالعه کلونینگ و بیان فرم کایمری و دودکامری CD40L محلول، از طریق پر...

full text

طراحی و تولید رده»‌ سلولی بیان کننده ِ ژن‌های‌UTR’ 5 و ‌3NS از عامل اسهال ویروسی گاوها ‌(BVDV)‌ به منظور ارزیابی کارآیی روش‌های درمانی علیه این ویروس

زمینه مطالعه:‌ ‌عامل مولد اسهال ویروسی گاو ‌(BVDV)‌ عامل مضرات اقتصادی، بهداشتی قابل توجهی در مزارع پرورش گاو است. به دلیل ناکارآمدی نسبی برنامه‌های ریشه کنی این ویروس، در سال‌های اخیر برای مبارزه با  آن تدابیر متعدد ضد ویروسی نظیر ژن درمانی به فراوانی به کار گرفته شده است. یکی از روش‌های ارزیابی کیفیت این تدابیر، استفاده از این ابزارهای ضد ویروسی در رده‌های سلولی اختصاصی بیان کننده آن ژن از طر...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 6  issue 3

pages  241- 248

publication date 2016-02-01

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023